1. 目的片段结合量低

1.1 琼脂糖凝胶未完全熔化时目的片段只有部分结合到膜上，导致其余的片段在后续洗涤过程中丢失以及出现制备管堵塞现象，最终影响回收效率。
建议：在切胶时尽可能去除不含目的片段的琼脂糖，确保buffer DE-A 的正确用量。在熔胶过程中要仔细检查确保无固体琼脂糖残留，间隔性的对样品进行摇晃促进凝胶的充分熔化。
1.2 小于400bp 的片段未加异丙醇
建议：务必确保已加入1 倍凝胶体积的异丙醇（100%）
1.3 电泳缓冲液pH 值过高，影响目的片段的结合
建议：建议加入10μl 3M NaAc 中和。

2. 结合的DNA片段过早的被洗脱
Buffer W2 中未加无水乙醇或者乙醇浓度不是95-100%的
建议：确保加入正确的乙醇量。每次使用后应拧紧瓶盖，以免乙醇挥发，降低回收率。

3. 洗脱效率低
建议：最后一次 Buffer W2 洗涤完后不要将制备管放于负压装置上抽得过干。
洗脱液或者去离子水65°C 预热以及增加洗脱前静置时间至5min，都可提高洗脱效率。
选用合适浓度的琼脂糖凝胶电泳，上样量不超过制备管的最大结合量（8μg）